Kỹ thuật nuôi cấy tế bào lympho

Đăng ngày 3/11/2015 10:08:18 AM | Thể loại: | Chia sẽ bởi: Tăng Nguyễn Minh | Lần tải: 10 | Lần xem: 0 | Page: 32 | Kích thước: 3.06 M | Loại file: ppt
Đây là bản xem thử online, xin hãy chọn download miễn phí bên dưới để xem bản đẹp dạng .ppt

bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy tế bào lympho, . . Chúng tôi giới thiệu đến bạn đọc tài liệu Kỹ thuật nuôi cấy tế bào lympho .Để chia sẽ thêm cho bạn đọc nguồn thư viện tham khảo giúp đỡ cho công tác giảng dạy, học tập và nghiên cứu khoa học, trân trọng kính mời đọc giả đang cần cùng xem , Thư viện Kỹ thuật nuôi cấy tế bào lympho trong chủ đề được chia sẽ bởi bạn Tăng Nguyễn Minh đến mọi người nhằm mục tiêu tham khảo , tài liệu này đã chia sẽ vào chuyên mục , có 32 trang, thuộc định dạng .ppt, cùng chủ đề còn có Bài giảng ,bạn có thể download free , hãy giới thiệu cho cộng đồng cùng xem KỸ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO LYMPHO MỞ ĐẦU Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype Tế bào lympho của máu ngoại vi Tế bào lấy từ nước ối Tế bào gai nhau Tế bào tủy xương Tế bào da MỞ ĐẦU Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype Tế bào lympho của máu ngoại vi MỞ ĐẦU Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype Tế bào lấy từ nước ối MỞ ĐẦU Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype Tế bào gai nhau MỞ ĐẦU Các tế https://nslide.com/bai-giang/ky-thuat-nuoi-cay-te-bao-lympho.mx36zq.html

Nội dung

KỸ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO LYMPHO
MỞ ĐẦU
Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype
Tế bào lympho của máu ngoại vi

Tế bào lấy từ nước ối

Tế bào gai nhau

Tế bào tủy xương

Tế bào da
MỞ ĐẦU
Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype
Tế bào lympho của máu ngoại vi
MỞ ĐẦU
Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype
Tế bào lấy từ nước ối
MỞ ĐẦU
Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype
Tế bào gai nhau
MỞ ĐẦU
Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype
Tế bào tủy xương
MỞ ĐẦU
Các tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy trong kỹ thuật lập karyotype
Tế bào da
MỞ ĐẦU
Lấy tủy xương
Lấy nước ối
Lấy gai nhau
MỞ ĐẦU
Lấy máu ngoại vi
Sinh thiết da
NGUYÊN LÝ
Bạch cầu hạt ưa acid
Bạch cầu Mono
Bạch cầu hạt ưa base
Bạch cầu hạt trung tính
Hồng cầu
Bạch cầu lympho
NUÔI CẤY
Lympho chiếm 25-40% bạch cầu trong máu ngoại vi
Lympho-T chiếm khoảng 60-75% tế bào lympho
NGUYÊN LÝ
NUÔI CẤY
Chu kỳ tế bào
NGUYÊN LÝ
Các thành phần của môi trường nuôi cấy
PHA (Phytohemaglutinin)
Amino acid cần thiết (L-glutamine,...)
Đường, polysaccharide (glucose, galactose, dextrose, sucrose,...)
Muối khoáng và dung dịch đệm
Vitamin
Kháng sinh và kháng nấm
pH khoảng từ 6,8 – 7,8
NUÔI CẤY
NGUYÊN LÝ
Tế bào lympho –T
(Không còn khả năng phân chia)
Sau 24 giờ
Tế bào lympho – T
(Bước vào thời kỳ G1)
Tế bào lympho – T
(Phân bào lần 1)
Tế bào lympho – T
(Phân bào lần 2)
Sau 48 giờ
Sau 72 giờ
PHA
Tế bào lympho – T
(Phân bào lần 3)
Sau 96 giờ
NUÔI CẤY
Sau 72 giờ
NGUYÊN LÝ
Làm ngừng quá trình phân chia để thu các tế bào ở kỳ giữa
Sốc nhược trương
Cố định
THU HOẠCH
NGUYÊN LÝ
Làm ngừng quá trình phân chia để thu các tế bào ở kỳ giữa
Colcemid
Colchicine
Tác dụng của colcemid và conchicine
Ức chế sự hình thành thoi vô sắc
THU HOẠCH
NGUYÊN LÝ
Sốc nhược trương
Dung dịch nhược trương thường được sử dụng là KCl 0,075M (0,56%) kết hợp với Citrat Natri 0,8% (tỷ lệ 20:1)
Tác dụng của dung dịch nhược trương
Phá hủy hồng cầu
Làm tăng thể tích tế bào lympho
THU HOẠCH
NGUYÊN LÝ
Cố định
Làm cho tế bào giữ nguyên trạng thái ngay tại thời điểm mà chúng ta cố định.
Dung dịch carnoy (3 methanol : 1 acid acetic)
Tác dụng của dung dịch carnoy
Kết tủa protein
Kết tủa hemoglobin
màng tế bào không hồi tính
Loại nước của tế bào
THU HOẠCH
NGUYÊN LÝ
Mẫu thu hoạch
Nhỏ tiêu bản
Nhuộm tiêu bản
Quan sát dưới KHV và chụp ảnh
Lập karyotype
PHƯƠNG TIỆN & DỤNG CỤ
TIẾN HÀNH
Phòng vô trùng
Máy ly tâm
Giá ống nghiệm và ống nghiệm vô trùng (Nắp xanh, loại 15 ml )
Găng tay vô trùng
Bơm kim tiêm vô trùng, bông, đèn cồn
Pipette Pasteur
Tủ ấm 37 oC
Máy Votex
HÓA CHẤT
TIẾN HÀNH
Môi trường nuôi cấy (PB-MAX TM Karyotyping của hãng GIBCO, đã có sẵn PHA)
Cồn 70 o
Heparin (Heparin Sodium 5000U/ml)
Colcemid (Hãng GIBCO, nồng độ 10 µg/ml)
Dung dịch KCl 0,075M
Citrat Natri 0,8%
Methanol và acid acetic tuyệt đối. (>95%)
Thành phần chính trong môi trường PB-MAX TM Karyotyping của hãng GIBCO
PHA (Phytohemaglutinin)
L-glutamin
Huyết thanh bê
Gentamicine sulfate 35 µg/ml
Chỉ thị màu phenol red (pH=7-7,4)
TIẾN HÀNH
HÓA CHẤT
NUÔI CẤY
TIẾN HÀNH
Chuẩn bị môi trường
Lấy mẫu
Cấy tế bào
NUÔI CẤY
TIẾN HÀNH
Chuẩn bị môi trường
Ngay trước khi nuôi cấy
Rã đông ống nuôi cấy chứa 5 ml môi trường trong tủ ấm 37 oC.
Dán nhãn: tên bệnh nhân, mã số, ngày XN
Trước các đợt nuôi cấy
Rã đông chai môi trường 100 ml.
Chia đều môi trường vào 20 ống nuôi cấy, mỗi ống 5 ml.
Ghi hạn sử dụng và bảo quản trong tủ đông.
NUÔI CẤY
TIẾN HÀNH
Lấy mẫu
Lấy mẫu bằng bơm kim tiêm đã được tráng bằng heparin.
Để lắng máu trong khoảng thời gian từ 30 phút đến 1 giờ.
Làm giàu bạch cầu trong mẫu nuôi cấy bằng cách loại bỏ bớt hồng cầu.
Huyết tương
Bạch cầu và tiểu cầu
Hồng cầu
NUÔI CẤY
TIẾN HÀNH
Cấy tế bào
Trộn đều mẫu.
Cho vào mỗi ống 0,5 ml mẫu rồi trộn đều
Ủ ống môi trường trong tủ ấm ở 37 oC với góc nghiêng 45 o trong vòng 68 – 72 giờ.
TIẾN HÀNH
THU HOẠCH
Làm ngừng quá trình phân chia để thu tế bào ở kỳ giữa
Sốc nhược trương
Cố định nhẹ
Cố định
TIẾN HÀNH
THU HOẠCH
Làm ngừng quá trình phân chia để thu tế bào ở kỳ giữa
Cho vào ống nuôi cấy 30µl colcemide (10µg/ml)
Trộn đều bằng votex
Ủ trong tủ ấm 37°C trong vòng 1 giờ.
Nồng độ colcemid quá cao
Nồng độ colcemid vừa đủ
TIẾN HÀNH
THU HOẠCH
Sốc nhược trương

Ly tâm (tốc độ 1000-1200 vòng/phút trong 10 phút).
Loại bỏ phần dịch phía trên và cho vào mỗi ống 10 ml dung dịch nhược trương
(20 KCl 0,075M : 1 Citrat Natri 0,8% đã được ủ ấm ở 37°C).
Trộn nhẹ bằng pipette Pasteur.
Ủ trong tủ ấm ở trong 15 phút.
Ly tâm
Nhược trương
TIẾN HÀNH
THU HOẠCH
Cố định nhẹ

Cho thêm vào mỗi ống nuôi cấy 1 ml dung dịch carnoy đã làm lạnh và trộn đều.
Để ở nhiệt độ phòng (20-25oC) trong 2 phút.
Nhược trương
Cố định nhẹ
TIẾN HÀNH
THU HOẠCH
Cố định

Ly tâm (tốc độ 1200 vòng/phút trong 10 phút).
Loại bỏ phần dich nổi phía trên.
Cho vào ống 6 ml dung dịch carnoy lạnh.
Để ở nhiệt độ phòng (20-25oC) trong 15 phút.
Bước cố định này được lặp lai 3 lần.
Cố định
Lấy mẫu
Làm giàu bạch cầu
Nuôi cấy
Colcemid + ly tâm
Nhược trương
Cố định nhẹ
Cố định
TIẾN HÀNH
NUÔI CẤY
THU HOẠCH
THE END